Trypsinisering er processen med celledissociering ved hjælp af trypsin, et proteolytisk enzym, der nedbryder proteiner, for at adskille adhærente celler fra karret, hvori de dyrkes. Når trypsin tilsættes til en cellekultur, nedbryder proteinerne, som gør det muligt for cellerne at klæbe til karret.
Hvorfor trypsiniserer vi celler?
Trypsinisering udføres ofte for at tillade passage af cellerne til en ny beholder, observation til eksperimentering eller reduktion af graden af sammenflydning i kolben ved at fjerne en procentdel af cellerne.
Hvordan virker trypsin for at frigøre celler?
Trypsin/EDTA er en kombineret metode til at løsne celler. Trypsin skærer adhæsionsproteinerne i celle-celle- og celle-matrix-interaktioner ved at skære aminosyren i adhæsionsproteinerne specifikt ved lysin eller aginin på C-terminalen, hvis opstrømsaminosyre ikke er prolin.
Hvordan får du trypsiniserede adhærente celler?
Procedure
- Fjern mediet fra dyrkningsbeholderen ved aspiration og vask monolaget med en s altopløsning fri for Ca2+ og Mg 2+ for at fjerne alle spor af serum. …
- Dispenser nok trypsin eller trypsin/EDTA-opløsning i dyrkningsbeholder(e) til fuldstændigt at dække monolaget af celler og anbring i 37 °C inkubator i ~2 minutter.
Hvordan deaktiverer jeg trypsin i cellekultur?
Når celler vises løsrevet, tilføj 2 bindaf forvarmet komplet vækstmedium for at inaktivere trypsin. Disperger forsigtigt mediet ved at pipettere over cellelagets overflade flere gange for at sikre genvinding af >95% af cellerne. Til serumfrie kulturer, sojabønnetrypsinhæmmer (produktnr.