Når cellerne ser ud til at være frigjorte, tilsæt 2 volumener forvarmet komplet vækstmedie for at inaktivere trypsin. Disperger forsigtigt mediet ved at pipettere over cellelagets overflade flere gange for at sikre genvinding af >95 % af cellerne.
Hvordan stopper jeg trypsinaktivitet?
Trypsinfordøjelsen kan stoppes ved frysning eller ved at sænke reaktionens pH til under pH 4 ved at tilsætte myresyre, eddikesyre eller trifluoreddikesyre (trypsin vil genvinde aktiviteten, når pH hæves over pH 4). Fordøjede prøver kan opbevares ved -20°C.
Hvad neutraliserer trypsin?
A buffer indeholdende calcium- og magnesiumioner vil også bremse trypsinaktiviteten. FBS er dog den mere effektive måde at hæmme trypsinaktivitet på.
Inaktiverer serum trypsin?
Serum inaktiverer det resterende trypsin fra enzymatisk fordøjelse af nyrerne og de proteolytiske enzymer, der efterfølgende syntetiseres af cellerne. Frisk trypsiniserede celler kunne dyrkes til monolag i fravær af serum forudsat at de blev vasket gentagne gange for at fjerne resterende trypsin.
Hvor meget medie skal der til for at deaktivere trypsin?
Så længe du bruger mindst 1:1-forholdet 5-10 % serum-holdigt medium med dit trypsin, bør der være mere end tilstrækkelig hæmning efterfulgt af centrifugering og medium udveksling med frisk medium.
